核酸實驗不穩(wěn)定?可能是酶在“作祟”
瀏覽數(shù)量: 0 作者: 本站編輯 發(fā)布時間: 2025-11-03 來源: 本站
["wechat","weibo","qzone","douban","email"]
高質(zhì)量核酸是qPCR、轉(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ),
但自然界中的DNase/RNase
會快速降解樣本,導(dǎo)致實驗失敗。
尤其是RNase活性穩(wěn)定、難徹底失活,
微量污染就可能導(dǎo)致實驗失??!
因此搭建無DNase/RNase的實驗環(huán)境,
對出結(jié)果至關(guān)重要。實驗卡殼不用愁,
科研人專屬電子木魚已開光!
速速領(lǐng)取您的科研賽博上上簽,
解鎖《驅(qū)“酶”指南》實驗室秘籍,
轉(zhuǎn)發(fā)此推文到“相親相愛課題組群”,
本周必逢 ↓
擴增Buff
qPCR不異常Ct值穩(wěn)到離譜
DNase和RNase是分別特異性降解DNA和RNA的水解酶。它們通過切斷核酸分子中的磷酸二酯鍵使核酸鏈斷裂,導(dǎo)致降解。RNase因其二硫鍵結(jié)構(gòu)而具有極高的穩(wěn)定性,能夠抵抗高溫煮沸甚至變性劑,在失活后還可重新折疊恢復(fù)活性,這使得它成為RNA相關(guān)實驗的頭號天敵。污染來源主要分為兩大類:
? 實驗人員:皮膚、汗液、唾液(飛沫)和頭發(fā)均含有大量核酸酶。
? 實驗器材:移液器、吸頭、離心管、玻璃器皿、實驗臺面及儀器按鍵等若未妥善處理,極易附著核酸酶。
? 試劑與水:普通蒸餾水或去離子水以及化學(xué)試劑在生產(chǎn)儲存過程中可能受到污染。
? 空氣中灰塵微粒:可攜帶核酸酶落入開放放置的試劑或樣本中。
? 內(nèi)源性污染是指樣本自身攜帶的核酸酶,所有生物組織和細胞樣品均含有內(nèi)源性核酸酶。一旦樣本離開活體或其原有生長環(huán)境,內(nèi)源酶便會開始降解RNA/DNA。降解速度取決于內(nèi)源酶含量和所處環(huán)境溫度。例如,肝臟、胰腺、脾臟、胸腺、腦組織以及植物組織等均含有豐富的內(nèi)源核酸酶,若處理不當(dāng),核酸會迅速降解。
針對這些潛在風(fēng)險,選擇可靠的無酶耗材是防控污染的第一步。愛津生物所有產(chǎn)品——從離心管、吸頭、深孔板到PCR板、細胞培養(yǎng)系列等均在十萬級無塵車間內(nèi)生產(chǎn)制造,出廠前經(jīng)嚴格檢測,確保無DNase/RNase污染、無熱原、無PCR抑制劑。讓科研人員能夠安心專注于實驗本身,而非擔(dān)憂外源風(fēng)險。
02 建立無DNase無RNase實驗環(huán)境
建立潔凈的核酸操作環(huán)境需從環(huán)境、耗材、操作和試劑多方面系統(tǒng)入手。
盡可能設(shè)立用于RNA/DNA操作的專用超凈工作臺或區(qū)域。定期使用核酸酶清除劑擦拭臺面和儀器表面。這些清除劑能有效使核酸酶失活,且通常無毒無腐蝕性,使用后需用無酶水擦拭去除殘留。
玻璃與金屬器皿,可通過干烤滅菌法,或使用核酸酶清除劑處理,后者更為便捷安全。
優(yōu)先選購商業(yè)化的、無DNase/RNase的耗材,開包即用,更加可靠安全。
愛津生物所有耗材產(chǎn)品均通過ISO13485質(zhì)量管理體系和CE認證,生產(chǎn)基地面積達26000㎡,配備5500㎡十萬級、500㎡萬級無塵車間,嚴格按照標準流程生產(chǎn)與質(zhì)控,可為實驗人員提供真正“開包即用”的無酶耗材保障。
實驗前佩戴干凈的無粉手套和口罩。接觸任何潛在污染源(如門把手、電話、自己的皮膚或頭發(fā))后應(yīng)立即更換手套,操作RNA樣本時盡量避免說話。
在所有涉及試劑的步驟中最好都選用帶濾芯的吸頭,其高效過濾和強疏水性可有效防止氣溶膠污染移液器內(nèi)部,避免交叉污染。
任何時候懷疑有污染可能,應(yīng)立即更換手套、離心管及吸頭。將試劑進行小份分裝,每次實驗使用單獨的分裝瓶,避免反復(fù)取用導(dǎo)致整瓶試劑被污染。
針對內(nèi)源性污染,關(guān)鍵在于快速有效地抑制樣本中核酸酶的活性。
樣本采集后應(yīng)盡快處理。若無法立即提取核酸,必須采取快速冷凍措施(如直接投入液氮),以最大限度地減少RNA/DNA的降解。對于組織樣本,液氮碾磨是破碎組織并同步抑制內(nèi)源酶最有效的方法。
有效保護樣本RNA不被內(nèi)源酶降解,如RNAlater等。
在核酸提取階段,應(yīng)使用能迅速滅活內(nèi)源核酸酶的裂解液。對于內(nèi)源酶含量高的組織(如肝臟、胰腺、植物組織等),推薦使用含苯酚的裂解液,以增強滅活能力。電動勻漿器與液氮碾磨配合使用,能確保組織細胞被快速、徹底地勻漿,使裂解液中的有效成分立即抑制住細胞內(nèi)核酸酶。
愛津生物提供多種規(guī)格離心管及儲液耗材,為不同樣本類型提供匹配解決方案,從樣本處理到核酸提取全程防污染。
對于自配試劑,務(wù)必使用無酶水和經(jīng)過處理的器皿配制。
愛津生物所有耗材均無DNase/RNase污染、無熱原、無PCR抑制劑,可放心用于高靈敏核酸實驗。
03 無DNase/RNase環(huán)境檢驗
定期檢驗實驗室無DNase/RNase環(huán)境,同樣關(guān)鍵。
用待驗證的水或緩沖液孵育一段完整的RNA或DNA標準片段,一段時間后通過瓊脂糖凝膠電泳觀察。
條帶清晰表明無污染,出現(xiàn)拖尾或條帶消失則表明存在降解。
使用商品化的高靈敏度熒光底物檢測試劑盒,可以快速、定量地檢測出極微量的RNase或DNase活性,有助于精準定位污染源。
丟棄可能污染的吸頭、離心管等實驗室耗材,啟用新批次試劑。
使用專用核酸清除劑擦拭臺面、儀器,并對實驗區(qū)域進行紫外線照射。
愛津生物的耗材產(chǎn)品系列覆蓋900余種,包括深孔板、移液吸頭、管柱類、儲液槽、PCR系列、細胞培養(yǎng)類等,全面滿足不同實驗場景的無酶防控需求,為實驗室構(gòu)建持久穩(wěn)定的潔凈體系。
維持無DNase/RNase環(huán)境,是確保分子生物學(xué)實驗結(jié)果可靠的基礎(chǔ)。這不僅依賴于實驗人員的規(guī)范意識,更需要通過可靠的實驗耗材予以保障。
Ready ?
實驗成功的密鑰已就位
帶上愛津生物這份耗材“潔凈保障”,
去解鎖每一次精準的數(shù)據(jù)吧!
環(huán)境Buff
無酶超干凈 實驗污染率清零
愿大家在科研路上少走彎路、成果豐碩
愛津生物將以品質(zhì)耗材為盾,
為您的實驗結(jié)果保駕護航
助您書寫屬于自己的科研新篇章!